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细胞传代培养

日期: 2019-07-10
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细胞传代培养

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。

传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

	细胞传代培养

二、材料和试剂

1、细胞:贴壁细胞株

2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)

3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等


三、操作步骤

1、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。

观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

附:消化液配制方法:

称取0。25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。

胰酶溶液中也可加入EDTA,使最终浓度达0.02%。


无菌操作的注意事项:细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯杀菌1h,操作前用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上口罩和帽子,操作时不能大声说话,双手戴上一次性橡胶手套,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

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